PCR實(shí)驗(yàn)室為什么出現(xiàn)污染

PCR實(shí)驗(yàn)室又稱基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。它利用分子生物學(xué)技術(shù)對核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增，也可以看作是一種特殊的核酸體外復(fù)制。采用基因追蹤系統(tǒng)掌握人體內(nèi)容，檢測精度可達(dá)納米級?，F(xiàn)在PCR技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于傳染病、腫瘤靶向、生殖遺傳學(xué)等領(lǐng)域，但由于待測核酸的多重檢測數(shù)量較多，即使是少量的污染也很容易造成假陽性結(jié)果。其次，PCR實(shí)驗(yàn)室要求比較高，實(shí)驗(yàn)過程復(fù)雜。如果省略中間環(huán)節(jié)，可能會造成假陰性結(jié)果。

在PCR實(shí)驗(yàn)過程當(dāng)中很容易發(fā)生污染。造成污染的主要原因有四個(gè)：

1、PCR產(chǎn)物污染。這也是PCR實(shí)驗(yàn)室污染的常見原因。PCR產(chǎn)物經(jīng)過反復(fù)擴(kuò)增，拷貝量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR的檢測限，因此即使是少量的污染也足以造成假陽性檢測結(jié)果。

2、試劑污染。在試劑制備過程當(dāng)中，試劑因接觸受污染的容器、移液器、移液器吸頭、溶液等而受到污染。

3、待測樣品被污染。放置樣品的容器被污染或由于容器密封性不好造成樣品與外界的接觸被污染；其次，在核酸提取過程當(dāng)中使用了被污染的移液器或移液器吸頭，造成PCR實(shí)驗(yàn)室受到污染；此外，有些樣品含有雜質(zhì)，如果散落在空氣中，可能會發(fā)生交叉污染。

4、氣溶膠污染。如果氣溶膠含有病毒和其他污染物并擴(kuò)散到空氣中，它們很可能會污染PCR實(shí)驗(yàn)室。氣溶膠是由空氣和液體表層之間的摩擦產(chǎn)生的。打開蓋子，搖動反應(yīng)管，反復(fù)抽吸污染注射器的樣品，造成形成氣溶膠，可能造成交叉污染。根據(jù)計(jì)算，一個(gè)氣溶膠粒子可以包含48000個(gè)拷貝。因此，應(yīng)特別注意氣溶膠造成的污染。

只要PCR實(shí)驗(yàn)室被污染，之前的結(jié)果報(bào)告就無效，不可進(jìn)行其他實(shí)驗(yàn)操作。因此，必須找到污染源并徹底清除，才能獲得準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。